宁波新芝生物科技股份有限公司地址（宁波新芝生物科技股份有限公司）

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本文目录一览：

• 1、国内有哪些超声医疗设备厂商？
• 2、如果肝酶高，GPT206,GOT236,还能不能接受抗结核治疗呢
• 3、宁波康贝生化有限公司怎么样？
• 4、JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎机怎么使用及图

国内有哪些超声医疗设备厂商？

1青岛海尔()

2

飞利浦（中国）投资有限公司

3

通用电气医疗系统(中国)有限公司

4

西门子（中国）有限公司

5

东芝医疗系统（中国）有限公司

6

沈阳东软医疗系统有限公司

7

深圳市威尔德医疗电子有限公司

8

江苏中惠医疗科技股份有限公司

9

日立医疗器械（北京）有限公司

10

汕头超声仪器研究所有限公司

11

海鹰企业集团有限责任公司

12

湘荣电子设备有限公司

13

绵阳索尼克电子有限责任公司

14

无锡祥生医学影像有限责任公司

15

重庆海扶（HIFU）技术有限公司

16

上海麦迪逊医疗器械有限公司

17

宁波新芝生物科技股份有限公司

18

北京启蓝恒业科技有限公司

19

秦皇岛市康泰医学系统有限公司

20

北京源德生物医学工程有限公司

21

上海爱申科技发展股份有限公司

22

重庆博恩富克医疗设备有限公司

23

山东新华医疗器械股份有限公司

24

北京东方惠尔图像技术有限公司

25

北京天惠华数字技术有限公司

26

深圳百胜医疗科技有限公司

27

深圳京柏医疗设备有限公司

28

上海交大新地实业公司

29

深圳市贝斯曼精密仪器有限公司

30

深圳市开立科技有限公司

31

必能信超声（上海）有限公司

32

洁康超声波（香港）有限公司

33

上海阿洛卡医用仪器有限公司

34

中科电子设备有限公司

35

徐州市科健高新技术有限公司

36

徐州市圣普医疗设备技术有限公司

37

成都希统医疗设备有限公司

38

顺德长兴超声设备有限公司

39

深圳市恩普电子技术有限公司

40

泰安市迈迪医疗电子有限公司

41

深圳市德迈科技有限公司

42

深圳市施博瑞科技实业有限公司

43

北京诺亚同舟医疗技术有限公司

44

东莞隆博医疗科技有限公司

45

桂林市啄木鸟医疗器械有限公司

46

深圳市德力凯电子有限公司

47

北京精博科技发展有限公司

48

桂林市巨星电子设备有限责任公司

49

徐州市大为电子设备有限公司

50

天津市索维电子技术有限公司

如果肝酶高，GPT206,GOT236,还能不能接受抗结核治疗呢

两种药物代谢酶活性测定

一、 DDPH对大鼠肝脏微粒体CYP450及Ⅱ相结合酶活性的影响

材料和方法

1 材料

1.1 实验动物

雄性SD大鼠，体重220±20 g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。

1.2 仪器设备

Mettler AE200电子天平（Mettler Toledo公司）

161F 4℃冰箱（美菱公司）

SANYO 医用低温冰箱（-30℃）（Sanyo公司）

8525超低温冰箱（-70℃）（Forma Scientific公司）

3-18K高速低温离心机（Sigma公司）

TGL-16G台式高速离心机（上海安亭科学仪器厂）

PB-20 pH计（Sartovius公司）

F-4500荧光分光光度计（Hitachi公司）

ELX800uv酶标仪（BIO-TEK公司）

SPD-10A高效液相色谱仪系统（包括LC-10ADvp输液泵、CTO-10AS柱温箱、SPD-10A紫外检测器，Shimadzu公司）

HITACHI L2100高效液相色谱仪系统（包括L2100四元梯度泵、L2200自动进样器、L2300荧光检测器，Hitachi公司）

N2000色谱工作站（浙江大学智达信息工程有限公司）

DKZ-450B型电热恒温振荡水槽（上海森信实验仪器有限公司）

722s可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）

DY89-II型电动玻璃匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司）

UPH-IV-10T型超纯水机（上海优普实业有限公司）

1.3 药品与试剂

DDPH（纯度≥99.5%，中国药科大学提供）；Tris-base为Roche公司产品；氧化型辅酶Ⅱ（NADP），葡萄糖6-磷酸脱氢酶，6-磷酸葡萄糖二钠，红霉素（Erythromycin），甲氧基异恶唑（Methoxyresorufin），乙氧基异恶唑（Ethoxyresorufin），戊氧基异恶唑（Pentoxyresorufin），异恶唑（Resorufin），甲苯磺丁脲，4-羟基甲苯磺丁脲，对羟基联苯（p-Pheylpohenol），还原型谷胱甘肽（GSH），UDPGA，β萘黄酮均为Sigma-Aldrich公司产品；BCA蛋白定量试剂盒为Pierice公司产品；地塞米松磷酸钠注射液（5 mg•mL-1），江苏涟水制药有限公司生产；注射用苯巴比妥钠（0.1 g），上海新亚有限公司生产；盐酸苯胺，4-氨基酚，氢溴酸右美沙芬，O-去甲基右美沙芬，普萘洛尔，1-氯2，4-二硝基苯（CDNB），硫酸奎宁，苯酚，硫酸锌，三氯醋酸，高氯酸，氯仿，甲醛，乙酰丙酮，乙腈，甲醇，醋酸等及其他无机和有机试剂均为国产分析纯。

2 方法

2.1 动物分组及给药

将实验大鼠随机分成以下组，每组6～8只。

分组情况 所给药物及组别 给药剂量 给药方式 给药时间

药物组 DDPH（低剂量组） 12.5 mg/kg/d ig，bid 连续7 d

DDPH（中剂量组） 25 mg/kg/d ig，bid 连续7 d

DDPH（高剂量组） 50 mg/kg/d ig，bid 连续7 d

对照组 0.5%羧甲基纤维素钠 10.0 mL/kg/d ig，bid 连续7 d

地塞米松组 地塞米松磷酸钠注射液

（CYP3A阳性对照组） 75 mg/kg/d ip 连续4 d

苯巴比妥组 注射用苯巴比妥钠

（CYP2B阳性对照组） 80 mg/kg/d ip 连续3 d

β萘黄酮组 β萘黄酮

（CYP1A1/2阳性对照组） 80 mg/kg/d ip 连续3 d

乙醇组 25%乙醇

（CYP2E1阳性对照组） 10 mL/kg/d ig 连续7 d

2.2 肝微粒体的制备

采用钙沉淀法制备肝微粒体[27]。

各处理组大鼠末次给药后，禁食不禁水，24 h后断头处死。迅速打开腹腔和胸腔，作门静脉插管，剪断下腔静脉，用注射器吸取预冷的生理盐水自门静脉冲洗肝脏至土黄色。将肝脏剪切至适量大小组织块，用滤纸吸干表面水分，称重。按1∶4（W/V）比例加入匀浆缓冲液（50 mmol•L-1 Tris-1.15% KCl，pH＝7.4）匀浆后于4℃下12 000 g离心20 min。取上清液，按10∶1（V/V）比例加入相应量的88 mmol•L-1 CaCl2，混匀，冰浴5 min。4℃下，27 000 g离心15 min，得粉色半透明沉淀，即为肝脏微粒体。沉淀冲洗一次，重悬浮于0.25 mol•L-1蔗糖溶液中，分装，于-70℃储存待测。

2.3 肝微粒体蛋白含量测定

蛋白含量测定采用BCA法，用牛血清白蛋白作为标准，参照试剂盒说明书操作。

（1）取试剂A与试剂B，按A∶B=50∶1（V/V）比例,充分混匀，得BCA工作液。

（2）取BSA蛋白标准品用超纯水稀释得到2，1.5，1，0.75，0.5，0.25 mg•mL-1系列标准浓度溶液。

（3）取适量蛋白标准溶液或待测样品，按1∶20（V/V）加入工作液，充分混合。

（4）37℃温孵30 min，冷却至室温，转移至96孔板，ELX800uv酶标仪测定540 nm处吸光度值。

（5）按所得蛋白标准曲线计算肝微粒体样品混悬液蛋白浓度。

2.4 细胞色素P450酶学分析

2.4.1 CYP450总酶含量测定

采用Omura和Sato的方法[28]测定CYP450总酶含量。

（1）取待测样品用缓冲液稀释得0.3～1 mg•mL-1的蛋白混悬液。

（2）加入连二亚硫酸钠2～3 mg，轻轻混匀。

（3）将样品等量分装入两个比色杯中，样品杯通入CO气体约30 s，以气泡连续，液体不溢出为好。

（4）将比色杯置于722s可见分光光度计中，以参照杯作为空白调零，测定样品杯在450 nm和490 nm处吸光度值（分别为A450和A490）。按以下公式计算CYP450总酶含量：

2.4.2 乙氧基异恶唑O-脱乙基酶（Ethoxyresorufin O-deethylase，EROD），甲氧基异恶唑O-脱甲基酶（Methoxyresorufin O-demethylase, MROD）及戊氧基异恶唑O-脱烷基酶（Pentoxyresorufin O-dealkylase, PROD）活性测定

EROD，MROD及PROD活性根据荧光法以Resorufin为标准品，在荧光分光光度计上测定[29]。

基本原理：

Resorufin在激发波长为530 nm，发射波长为585 nm时有最大荧光吸收峰。

（1）试剂配制：1 mmol•L-1 Methorxyresorufin；1 mmol•L-1 Ethorxyresorufin；1 mmol•L-1 Pentoxyresorufin（均溶于DMSO）；50 mmol•L-1 Tris-25 mmol•L-1 MgCl2，pH＝7.4；10 μmol•L-1 Resorufin。

（2）取2.5 mg•mL-1微粒体蛋白60 μL，加入1 mmol•L-1的底物6 μL，Tris-MgCl2缓冲液加至570 μL，最后加入NAPDH生成体系30 μL，在37℃水浴振摇孵育5 min。

（3）加入1 mL甲醇终止反应，于3 000 g下离心10 min。

（4）取上清液置荧光分光光度计于激发波长为530 nm，发射波长为585 nm下测定其荧光强度值。由Resorufin标准曲线，按以下公式计算MROD、EROD、PROD酶活性：

标记一

2.4.3 甲苯磺丁脲羟基酶（Tolbutamide hydroxylase，Tol-hydroxylase）活性测定

Tol-hydroxylase 活性采用反相高效液相紫外检测法测定[30]。

（1）试剂配制：3 mmol•L-1甲苯磺丁脲；10 mmol•L-1 4-羟基甲苯磺丁脲；1 mmol•L-1 DDPH（溶于乙腈）；0.1 mol•L-1磷酸钾缓冲液，pH＝7.4；10 mmol•L-1醋酸钠缓冲液。

（2）取5 mg•mL-1微粒体蛋白50 μL，加入3 mmol•L-1甲苯磺丁脲10 μL，0.1 mol•L-1磷酸钾缓冲液120 μL，蒸馏水10 μL，最后加入NAPDH生成体系20 μL，在37℃水浴振摇孵育30 min。

（3）加入含有1 mmol•L-1 DDPH的乙腈溶液200 μL终止反应。

（4）涡漩2 min，15 000 g离心5 min。

（5）取上清液20 μL进入HPLC系统测试分析。

（6）HPLC分析条件：Nucleodur C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈/10 mmol•L-1醋酸钠缓冲液（37/63，V/V）；流速：1 mL•min-1；检测波长：230 nm。

（7）由4-羟基甲苯磺丁脲的标准曲线，按以下公式计算酶活性：

标记一2.4.3 右美沙芬O-脱甲基酶（Dextromethorphan O-demethylase，DXM O-demethylase）活性测定

DXM O-demethylase活性采用反相高效液相荧光检测法测定[31]。

（1）试剂配制：100 μmol•L-1右美沙芬；4 μmol•L-1 O-去甲基右美沙芬；1.5 mg•L-1普萘洛尔（溶于乙腈）；0.1 mol•L-1磷酸钾缓冲液，pH＝7.4；0.2% HAC（三乙胺调pH＝4.0）。

（2）取5 mg•mL-1微粒体蛋白20 μL，加入100 μmol•L-1右美沙芬25 μL，0.1 mol•L-1磷酸钾缓冲液125 μL，蒸馏水30 μL，最后加入NAPDH生成体系50 μL，在37℃水浴振摇孵育30 min。

（3）加入含有1.5 mg•L-1普萘洛尔的乙腈溶液250 μL终止反应。

（4）涡漩2 min，15 000 g离心5 min。

（5）取上清液20 μL进入HPLC系统测试分析。

（6）HPLC分析条件：Nucleodur C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈/甲醇/0.2%HAC（pH＝4.0）（50/40/125，V/V/V）；流速：1 mL•min-1；荧光检测波长：Ex=270 nm，Em=310 nm。

（7）由O-去甲基右美沙芬的标准曲线，按以下公式计算酶活性：

2.4.4 苯胺羟化酶（Aniline Hydroxylase，ANH）的活性测定

采用4-氨基酚形成法测定[32]。

（1）试剂配制：0.1 mol•L-1盐酸苯胺；0.1 mol•L-1 Tris-0.3 mmol•L-1 KCl-20 mmol•L-1 MgCl2，pH＝7.4；50%三氯醋酸；5%三氯醋酸；5%苯酚（含2% NaOH）；1 mol•L-1 NaCO3；10 μmol•L-1 4-氨基酚。

加样一览表：

缓冲液 蒸馏水 微粒体 盐酸苯胺 NAPDH

空白管 325 μL 25 μL 100 μL --- 50 μL

样品管 325 μL --- 100 μL 25 μL 50 μL

（2）按上表加样，依次放入37℃水浴中振摇孵育30 min。

（3）加入预冷的50%三氯醋酸100 μL终止反应。

（4）3 000 g离心15 min。

（5）取上清液350 μL加入5%苯酚50 μL混匀。

（6）加入1 mol•L-1 Na2CO3 100 μL混匀，于37℃水浴振摇孵育30 min，放置至室温，置ELX800uv酶标仪中测定630 nm处光密度值。

（7）由4-氨基酚标准曲线，按以下公式计算酶活性：

2.4.5 红霉素N-脱甲基酶（Erythromycin N-demethylase，ERD）活性测定

采用Nash试剂-甲醛形成法测定[32]。

（1）试剂配制：50 mmol•L-1 Tris-1.15% KCl，pH=7.4；25% ZnSO4；饱和Ba(OH)2；NADPH生成体系（含4 mmol•L-1 NADP，10 mmol•L-1 葡萄糖6-磷酸二钠，葡萄糖6-磷酸脱氢酶4 U•mL-1）；4 mmol•L-1红霉素；3.33 mmol•L-1甲醛标准液；Nash试剂（取醋酸氨5 g，乙酰丙酮100 μL，3%醋酸6 mL，混匀）。

（2）按加样一览表加样后（未加NADPH生成体系），依次放入37℃水浴中温孵约1 min。

（3）预孵后依次加入NADPH生成体系启动反应，37℃水浴振摇孵育20 min（标准管在加入NADPH生成体系后10 min时加入3.33 mmol•L-1甲醛标准液）。

加样一览表：

缓冲液 蒸馏水 微粒体 红霉素 NAPDH 甲醛标准品

空白管 250 μL 75 μL 100 μL --- 75 μL ---

标准管 250 μL 65 μL 100 μL --- 75 μL 10 μL

样品管 250 μL 75 μL 100 μL 50 μL 75 μL ---

（4）孵育结束后，依次加入25% ZnSO4 50 μL立即混匀后，终止反应，然后每管加入饱和Ba(OH)2 50 μL，混匀。

（5）样品于3 000 g下离心10 min。

（6）取上清液350 μL，加入150 μL Nash试剂，混匀后于50℃水浴振摇孵育30 min。孵育结束后，室温冷却，转移至96孔板，ELX800uv酶标仪测定其在420 nm处的光密度值。按以下公式计算酶活性：

2.5 Ⅱ相代谢酶活性分析

2.5.1 谷胱甘肽硫转移酶（Glutathion S-transferase，GST）活性测定

参照文献[33]方法测定。

试剂配制：50 mmol•L-1还原型谷胱甘肽；50 mmol•L-1 CDNB（溶于DMSO）；0.1 mol•L-1磷酸钾缓冲液，pH=6.5。

加样一览表：

空白对照 样品

0.1 mol•L-1磷酸钾缓冲液（pH=6.5） 960 μL 950 μL

50 mmol•L-1还原型谷胱甘肽 20 μL 20 μL

50 mmol•L-1 CDNB 20 μL 20 μL

微粒体样品 --- 10 μL

（2）按上表加样，最后加入微粒体蛋白后迅速混匀，于340 nm处记录单位时间光密度的变化。按下列公式计算GST含量：

2.5.2 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（Uridine Diphosphate Glucuronosyltransferase UGT）活性测定

参照文献方法测定[32]。

（1）反应液中含微粒体蛋白0.25 mg，0.25% TritonX-100 10 μL，50 mmol•L-1 MgCl2 25 μL，5 mmol•L-1对羟基联苯25 μL（溶于DMSO），1 mmol•L-1 Tris-HCl（pH7.4）25 μL，用双蒸水补足至250 μL。空白管不加微粒体，用双蒸水补足。

（2）反应液在37℃水浴温孵5 min后加入30 mmol•L-1 UDPGA 50 μL启动反应，继续温孵10 min。

（3）孵育结束后将样品置冰浴上，加入10%过氯酸250 μL，氯仿1 mL终止反应。

（4）振摇10 min，3 000 g离心5 min，取水相250 μL，加1.6 mol•L-1甘氨酸缓冲液（pH=10.3）1.75 mL，于激发波长290 nm，发射波长325 nm处测定荧光强度F，以硫酸奎宁作相对标准计算酶活性，按下列公式计算酶活性：

（5）硫酸奎宁标准曲线的制备：

取干净的EP管，向管中分别加入100 mg•L-1奎宁100 μL，200 μL，400 μL，800 μL，再分别加入0.05 mol•L-1硫酸，使总体积为4 mL。混匀后在激发波长350 nm，发射波长450 nm处测定样品中的荧光强度，求出标准曲线的k值。

3 数据的处理和分析

数据以均数±标准差（±s）表示，采用SPSS 11.5统计软件对数据进行统计学分析。

宁波康贝生化有限公司怎么样？

简介：宁波康贝生物是一家位于宁波的高科技生物技术公司。公司致力于新技术的研发、生产多种生化产品，同时也提供生物、化学方面的外包服务。主要业务领域包括：化学研究（有机合成和多肽合成）；生物研究（蛋白表达和抗体生产）；标记和生物偶联服务；临床前研究（动物模型和分子成像服务）等相关服务。公司将化学、生物、医药等多学科相融合，打造世界领先的高新技术平台，造福人类，并为药物开发、生命科学研究、医疗器械开发等领域的同仁提供优质产品与服务。

法定代表人：戴立军

成立时间：2012-03-22

注册资本：360万人民币

工商注册号：330215000046214

企业类型：有限责任公司(自然人投资或控股)

公司地址：宁波高新区木槿路65号新芝科技8楼

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