当前位置：首页 > 股吧 > 正文

三联虹普官网（三联虹普）

股吧
2022-12-17
79
更新：2022-12-17 02:25:09

今天给各位分享三联虹普的知识，其中也会对三联虹普官网进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

本文目录一览：

1、建筑行业
2、三为开头名称的股票有哪些,如三川股份等
3、三联虹普这支股票什么时候能涨？求高手回帖
4、华为云普惠AI：把人工智能变成“水电煤气”
5、三联虹普证监会都通过定增了为什么还要打压股价
6、做MTT时用的三联液配方是SDS10g，异丁醇5ml，10M HCl 0.1ml，没有异丁醇的话，用异丙醇行吗？急！！！

建筑行业

建筑行业特征：

2015年建筑工程行业的总产值超过18万亿元，超过加拿大整个国家的GDP，建筑工程行业是名副其实的超大规模行业。

固定资产投资是建筑工程增长的源动力。

2000-2015年，我国固定资产投资总额年复合增长率为21%，建筑业总产值年复合增长率为20%；

从历史数据拟合来看，固定资产投资与建筑业产值是线性相关的。

行业的特征：充分竞争

建筑工程行业是典型的充分竞争行业；

建筑工程行业较低的进入壁垒导致产业产能严重过剩，行业呈现“零散”的结构特征；

2015年，建筑业总产值18.万亿元，行业龙头中国建筑收入8800亿，市场占有率仅5%；

行业前四名份额集中度仅占全行业的15%；

分子行业来看，水利工程与铁路工程由于需方结构单一以及行政垄断干预等影响，集中度较高；

长期来看，建筑工程行业零散的产业结构特征是难以改变的；

参考国外建筑行业的集中度情况，未来我国建筑工程行业集中度提升的空间有限。

行业的特征：轻资产

与大家的印象不同，建筑工程行业是典型的轻资产行业；

2016年，建筑工程行业的固定资产/总资产的比例为7%；

以上市公司为观察对象，与其他行业进行横向比较，发现，建筑工程行业的固定资产/总资产的比例仅高于银行，房地产，非银行金融。

轻资产属性，缺乏必要的质押担保，是导致建筑企业融资困难的原因之一。

行业的特征：营运资金被占用

建筑工程项目的保证金制度，进度支付的特点导致企业营运资金被项目占用情况较为普遍；

建筑工程企业的商业模式本质上就是资金的流转。

建筑活动总需求：

人类活动所在之处，必有建筑工程

建筑活动总需求：

1.国内投资：

A，基建投资：城镇化+房地产配套，政府稳增长，民间投资

B，房地产投资：城镇化，房价预期

C，工业投资：制造业盈利性预期

2.海外工程（一带一路）

基建投资：细分行业与公司

1.铁路/轨道交通：中国中铁，中国铁建，隧道股份

2.公路：中国交建，山东路桥，四川路桥，成都路桥，北新路桥

3.水利电力：中国电建，葛洲坝，粤水电，围海股份

4.市政：腾达建设，宏润建设，浦东建设

5.园林生态：东方园林，铁汉生态，蒙草生态，丽鹏股份，岳阳林纸，名家汇

6.房屋建设：中国建筑，上海建工，宁波建工，龙元建设

7.冶金/矿产工程：中国中冶，中钢国际，中矿资源，金诚信

8.化学工程：中国化学，东华科技，三维工程，中化岩土，航天工程，三联虹普

9.水泥工程：中材国际

10.轻工工程：中国海诚

海外投资：细分行业与公司

1.专业国际承包商（窗口型公司）

业务模式：外面接进来，家里转出去

主要能力：海外市场开拓，跨国风险控制能力

代表性公司：中工国际，北方国际，中成股份，中国机械工程（H股）

2.国际工程商：

业务模式：承接+实施

主要能力：专业领域施工能力

代表性公司：中国交建，中国电建，葛洲坝，神州长城，中矿资源等

自上而下：以量为主主要研究对象

1.成本加成定价模式，毛利率相对稳定。

2.业绩的主要驱动来自于订单转化为收入的数量。

3.遵循“行业-订单-收入-业绩”的逻辑；

4.细分市场规模测算：

1），参考政府投资规划估算；

2），根据上游增速传导测算；

3），根据城镇化率提升，渗透率提化等比率测算；

5.市场份额：根据行业地位，过往市场占有率，中标率测算。

自下为上：以调研为核心

1.建筑细分行业众多，必须以个股调研为主要研究方法。

2.找到个股亮点后，应及时与同业印证，一旦判断具有行业趋势，将可能存在板块性机会（2010年装饰园林，2012年装饰，建筑智能，2016年PPP）

3.建筑行业公司独立行情众多，个股催化因素往往超越行业环境束缚。

4.当前宏观投资放缓环境下，自下而上的转型公司越来越多，是行业研究的重点。

盈利预测方法：

1.遵循“行业景气-订单-收入-业绩”的盈利预测方法。

通过行业景气和公司行业地位及竞争力，预测公司未来订单趋势。

通过可执行订单量（生效合同）和开工进度预测未来收入序列。

一般情况下，由于建筑行业采取成本加定价方法，毛利率大体保持平稳。

应仔细考察三项费用，资产减值损失，投资收益，税率等变量对盈利的影响。

此外考虑收购并表影响。

2.在以上盈利预测基础上，通过调研考察上市公司对此盈利预测的信心，业绩释放动力。根据上市公司信心和意愿对盈利预测进行调整。

3.结合行业景气度及同业公司情况进行调整。

4.结合季报业绩，年中订单数据动态调整年初盈利预测。

行业投资机会主要催化剂：

1.国家政策：经济刺激计划，一带一路战略，PPP改革，房地产政策

2.宏观经济数据：

GDP：一旦走弱，可能存在“稳增长”政策预期

利率：建筑公司订单对资金价格具有极大弹性

汇率：影响国际工程公司业绩

3.个股因素：

订单：（框架，新签合同，生效合同）

业绩增速

公司事件：同业收购，转型收购，股权激励等

建筑公司的估值：

1.不同细分行业，不同公司，大体可按照PEG估值

2.在PEG=1基础上，根据市场对业务内容的偏好（例如是否带有新兴产业），市值大小，公司资本市场形象，市场风格偏好等因素进行调整。

3.在考虑PEG估值基础上，从历史经验看，大多数建筑公司估值处于10-30倍PE之间，超出该范围具有收敛压力。

4.建筑公司不太适合用PB估值

利润表

宏观层面，行业投资增速--收入增速

1.对于建筑工程企业而言，从宏观角度而言，企业的收入增速与投资增速密切相关。

2.中国建筑自成立以来收入增速便与固定资产投资增速高度相关；

3.2011年铁路与固定资产投资大幅下滑背景下，已然完成业务多元化的中国中铁与中国铁建仍然难逃收入负增长的梦魇。

微观层面，新签订单--收入增速

1.对于建筑工程企业而言，从微观的角度而言，企业的收入增速与订单增速密切相关。但是值得注意的是，新签订单增速与收入增速之间并不是严格的对应关系。

2.建筑行业的业务模式是订单完成模式，收入根据订单的执行进度进行确认。因此，对于建筑工程企业而言，新签订单的增速直接关系到企业的收入增速。

3.决定建筑企业收入的要素包括：新签订单，新签订单结转率，在手订单，在手订单结转率。

4.其中，新签订单结转率和在手订单结转率与宏观的资金面密切相关，当宏观资金面稳定的背景下，建筑企业的收入主要由新签订单和在手订单决定，当宏观资金面趋紧时，新签订单结转率和在手订单结转率都会大幅下降，建筑企业的收入将由订单的结转率决定。

零散的产业结构：

1.零散的产业结构，充分竞争导致行业整体微利。

序号子行业毛利率

1 铁路工程 5-10%

2 路桥工程 9-15%

3 水利工程 10-14%

4 国际工程 11-22%

5 钢结构 14-30%

6 工业工程 12-25%

7 房屋工程 8-11%

8 园林工程 16-30%

9 装修工程 16-38%

轻资产下企业的产能费用化

1.建筑行业轻资产的属性导致其产能一般以“费用化”的形成呈现。建筑工程企业呈现典型的“轻资产”属性。

2.建筑企业的产能一般表现为资金（营运资金占用导致），人员，管理。而这些产能一般以费用的形式体现，其中人员产能一般通过职工薪酬的形式在销售费用和管理费用中体现；管理一般通过管理费用的形式体现；资金一般通过财务费用的形式体现。

经营性资产和经营性负债为主

1.建筑工程行业的资产负债率较高。2016年，按照全行业口径，建筑工程行业的资产负债率为67%。以上市公司为观察对象，与其他行业进行横向比较，发现，建筑工程行业的资产负债率的比例仅低于银行，房地产，非银行金融。

2.从资产端来看，建筑工程企业的资产主要包括：货币资金（15.82%），应收账款（14.38%），其他应收款（4.87%），存货（27.30%），合计占比为62.38%

3.从负债端来看，建筑工程企业的负债主要包括：短期借款（7.42%），长期借款（15.11%），应付债券（4.67%），应付账款（35.63%），预收账款（14.68%），合计占比为77.51%

4.建筑工程企业的资产负债率主要是由于经营性负债较高。

5.从有息负债/总资产的情况来看，建筑央企为20.67%，地方国企为24.18%，建筑民企为17.22%，由此可见，经营性负债是导致建筑工程企业资产负债率较高的主要原因。

科目分析---货币资金

1.货币资金：建筑企业的货币资金主要由库存现金，银行存款，其他货币资金构成。

2.建筑企业由于其特殊的商业模式，其他货币资金的占比较高，因此在对建筑企业进行相关资金压力测试的时候，要将货币资金中企业不可动用的其他货币资金排除。

3.建筑企业的其他货币资金主要包括各项保证金，包括承兑汇票保证金，保函保证金，信用保证金

科目分析--应收账款

1.应收账款：建筑企业完工百分比的收入确认模式，业主根据工程进度支付的特点，导致应收账款成为建筑企业资产端的主要组成部分。

2.2016年建筑上市企业的应收账款占总资产的比例为14.88%

3.应收账款计提的坏账准备是影响建筑企业当期业绩的重要因素，2017年资产减值损失占净利润的比例接近30%

4.建筑企业的资产减值主要由九大减值准备构成：

坏账准备（占比最高），存货跌价准备，固定资产减值准备，上虞减值准备等等。

其中，除了坏账准备，存货跌价准备之外，其他五大减值准备一起计提，不得冲回。

由于建筑企业应收账款规模大，净利率低的特点，导致资产减值损失对于企业净利润的影响极大。

科目分析--存货

存货：建筑企业的存货与其他所有行业的存货都i不同，建筑企业存货的组成部分是“建造合同形成的已完工未结算资产”。

2017年，“建造合同形成的已完工未结算资产”占存货的比重高达38.29%

建造合同形成的已完工未结算资产：已确认收入和成本，由于没有进行结算所以没有计提应收账款。因此这一项基本上可以等同于建筑企业的应收账款。

有一部分的建筑企业，资产负债表呈现出“低应收，高存货”的特点，事实上就是“存货--已完工未结算”较多导致的。这也是园林企业被诟病最多的地方。

值得注意的是，对于绝大部分建筑企业而言，“存货--已完工未结算”基本不计提存货跌价准备。

这在一定程度上可以认为是建筑企业减值计提不充分。

园林企业，装饰企业，大部分基建类公司，建筑央企基本不计提“存货-已完工未结算”的跌价准备

科目分析--应付预收

应付预收：应付和预收是建筑企业负债主要组成部分，占比大约在50%左右。

事实上，应付预收本质上是建筑企业对于上下游议价能力的体现。建筑企业对于上游供应商的议价能力越强，则公司的应付账款较多；

建筑企业对于下游业主的议价能力较强，则公司的预收账款越多。

现金流量表

项目垫资+进度支付=收现滞后

建筑企业的收入确认模式未完工百分比法，但是工程款的支付是进度支付，因此收入的确认和工程款的支付之间存在一定的时差，在财务指标上就体现为收现比的滞后。

一般而言，建筑企业的收现比主要由宏观流动性和自身扩张战略决定。

当宏观流动性趋紧时，业主方（一般为地方政府和地方企业）就会放慢项目的支付进度，建筑企业的回款速度放慢，导致建筑企业的收现比下降。建筑行业零散的产业结构，充分竞争的行业竞争格局，导致建筑企业的议价能力极弱。

当宏观流动性收紧时，建筑企业的收现比与自身的扩张战略密切相关。当建筑企业规模快速扩张时，收现比下降时；当建筑企业规模扩张速度放慢时，收现比上升。

现金流与收款风险的评价

1.采用收现比与账龄结构来判断帐款回收风险

收现比=经营性现金流流入/收入，一般在70%以上为健康。

若账龄结构无明显老化迹象且无老账确认无法回收，则应收款风险处于健康可控状态。

2.不能简单采用经营性现金流净额正负来评价应收款风险

处于扩张期的建筑公司往往表现为经营性现金流净额为负，但并不能表明公司项目质量不好或面临较大帐款回收风险。

反之，处于收缩期的建筑公司经营性现金流净额很可能为正，但并不能表明其在手项目无收款风险

建材行业短期观点

基建的核心问题“资金”及“规范”，均已全面爆发，经过一年多时间的发酵之后，政策面已逐步改善，并有望快速传导至基本面，加之前两年承接的大量订单将于今年四季度释放，行业整体业绩将有所提升。

建材行业中期和长期观点

19-20年时十三五规划的最后两年，普速铁路剩余空间约3500-5250万亿，高铁约1500亿，公路（含高速）约3.7-5.13万亿，年均与前几年相对持平，基建“补短板”预期下，板块有望稳步推进。

核心标的：金螳螂，中国建筑，中国铁建，中国中铁

三为开头名称的股票有哪些,如三川股份等

三爱富，三安光电，三变科技，三川股份，三房巷，三丰智能，三钢闽光，三花股份，三环集团，三江购物，三聚环保，三力士，三联虹普，三联商社，三六五网，三毛派神，三木集团，三诺生物，三全食品，三圣特材，三泰控股，三特索道，三维工程，三维丝，三维通信，三五互联，三峡水利，三湘股份，三鑫医疗，三星电气，三一重工，三友化工，三元股份，三安光电，三孚股份，三棵树，三人行，三星新材，三超新材，三丰智能，三和管桩，三房巷，三六零，三维股份，三峡新材，三星医疗，三川智慧，三夫户外，三花智控，，三峰环境，三角轮胎，三美股份，三峡能源，三祥新材，三变科技，三德科技，三晖电气，三七互娱，三盛教育，三只松鼠，三生国健，三角防务，三利谱，三木集团，三峡旅游，三雄极光，三达膜，三旺通信，三维化学，三联虹普，三湘印象，三友联众，三孚新科，三友医疗，三毛B股，三爱健康集团，三和精化，三星FANG，三星高息房托-U，三巽集团，三宝科技，三生制药，三星中国龙网，三一国际，三和建筑集团，三盛控股，三彩家，三井物产，三菱电机，三星电子，三井住友金融，三菱日联金融，三宝农业，三驰惯性，三德利，三峰股份，三光科技，三禾生物，三和朝阳，三博会展，三川田，三多堂，三高股份，三好教育，三辰电器，三达奥克，三方股份，三工钢桥，三禾科技，三合盛，三和视讯，三鹤药业，三惠建设，三炬生物，三棱股份，三利节能，三联盛，三木众合，三清国旅，三瑞农科，三胜电气

三联虹普官网（三联虹普）第1张

三联虹普这支股票什么时候能涨？求高手回帖

你好，走势非常弱势，创业板股票，

在目前挤泡沫的行情下，短期很难有作为，建议减仓或者长线持有。

华为云普惠AI：把人工智能变成“水电煤气”

我们对AI是如何认知的？是曾经被封神的Alpha Go？是幻想中的无人驾驶技术？还是一串串密密麻麻的代码？总之，AI曾经是遥不可及、高冷且昂贵的。不过，2018年5月华为云提出了这样一个畅想：让AI走下神坛，同时也勾勒出了一个叫做“普惠AI”的愿景。

让人工智能技术变成像水、电、煤气一样的存在，有没有可能？华为云给出的答案是肯定的。

华为公司预计，到2025年智能终端数将达到400亿，届时全球企业对AI的采用率将达到86%，企业数据利用率将剧增至80%左右。很快，一个AI会渗透进生活的方方面面和各行各业各个角落的现实即将达成。

当AI从实验室走到城市、走进企业、走到街头巷尾、走进每个人的家里，就需要它变得“高而不贵”。华为云认为，所谓“普惠AI”，最重要的就是让普通的行业从业人员也能利用AI人工智能技术，自助式把数字技术与本行业的流程结合起来，形成新的智能联接。而智能联接将驱动前所未有的大规模创新，基于智能联接的全新商业模式和应用将改变企业的运作模式以及产品和服务的消费模式，推动数字经济实现规模发展，最终走向智能经济。

2018年5月，在中国国际大数据产业博览会上华为云首次提出了“普惠AI”的概念。在华为云眼中，AI应该是一组技术集合，是一种新的通用技术，并不简单的是一个独立产品，更不是一个封闭的系统。AI同时也应该成为像电力、互联网一样的基本生产力，通过智能联接使得众多行业效率实现指数级提升，这既是华为云做“普惠AI”的出发点，也是未来AI应该有的模样。

随着华为云“普惠AI”概念的提出和实践，AI 技术已经开始向它应该有的模样慢慢靠近。

一个照进现实的例子，是华为云EI的展开。今年，华为云与北京市交管局合作，在海淀上地三街开展了利用AI技术实现信号配时优化试点应用。在部署了EI交通智能体解决方案之后，据第三方公司（北京世纪高通科技有限公司）评估报告显示，这条东西方向的京城最堵道路之一，如今平均延误下降了15.2%，平均车速提升了15%。或许每天往返于上地三街的白领们不懂AI究竟是什么，但他们对这条变得没那么拥堵的路产生了好奇。

同样，另一条没那么拥堵的路也落地深圳。深圳交警将华为云的EI智能体运用于城市交通管理中，在坂田9个路口采用人工智能技术，平均车速提升了17%，通勤时间节省了10分钟，一杯早茶的时间就这样，在不知不觉间被节省了出来。

2018年华为云的“普惠AI”，不仅照进了城市，也落地工业和医疗领域。在工业领域中，如北京三联虹普通过EI工业智能体进行生产数据的智能分析，成功释放了产线柔性化能力，从而让企业更好的应对下游的个性化需求，有效提升下游需求匹配率28.5%；在医疗领域，华为云EI与金域医学合作，在宫颈癌病理监测领域取得阶段性突破，敏感度（真阳性率）超过99%，特异度（真阴性率）超过80%。

过去一年中，华为云EI尝试超过200个项目，6-10月先后发布了交通、工业、城市三大EI智能体，这是“普惠AI”的方案之一。而这，也仅仅是“普惠AI”萌芽期的产物，2018年的它“才露尖尖角”而已。

华为云的“普惠AI”与业界其它厂商所不同的是，它弥补了在迈向智能经济的过程中，AI技术的发展与行业落地之间的巨大落差。如何让AI高而不贵、让各行各业“用得起，用得好、用得放心”，如何与各行业的各种场景相连接，让AI成为智能经济的底座？这就要求“普惠AI”不仅是软件的普惠，也必须是硬件的普惠，以及工程化的普惠。那么，在这一过程中，人才和技术这块基石必然是绕不开的。

2018年10月华为全联接大会上，华为发布“全栈全场景”AI解决方案，对外展示了华为云“普惠AI”的另一种落地方式，即AI开发成本和门槛的降低，这意味着行业的开发者和从业者们可以站在华为云的平台上，跨过曾经的高门槛与AI对视。从前我们仰望AI，未来AI可以俯拾皆是。

华为云的“全栈”是从技术功能角度，包括芯片、芯片使能、训练和推理框架和应用使能在内的全堆栈技术方案；所谓“全场景”则包括公有云、私有云、各种边缘计算、物联网行业终端以及消费类终端等全场景的部署环境。其中，华为云全场景AI是软硬一体化方案，这也是华为云“普惠AI”的独特之处：包括基于可统一、可扩展架构的系列化AI IP和芯片Ascend 910（华为升腾9100）和Ascend 310（华为升腾310）；芯片算子库和高度自动化算子开发工具CANN；支持端、边、云独立的和协同的统一训练和推理框架MindSpore；以及提供全流程开发服务（ModelArts）,分层API和预集成方案的应用使能。

具体来说，比如华为自研的AI芯片Ascend系列基于统一的“达芬奇”架构，其好处是可以一次性开发算子、算力可扩展、一致的开发和调试体验、开发一次可跨各场景平滑迁移、超高带宽和极低时延以及可扩展的片上互联等。基于统一的达芬奇架构的Ascend系列芯片，可实现任何场景下，以最低成本获得最优性能。而在工程化方面，相对业界其它开发平台，ModelArts是更快的普惠AI开发平台，覆盖数据标注与准备、模型训练、模型调优、模型部署等AI开发全流程，为AI应用开发提供一站式服务。

依托华为30年的技术积累，在华为云看来，AI并不高。依托华为云的“全栈全场景”AI解决方案，华为云想让行业从业者也能拥有同样的平台、站在同样的高度，让AI在开发、应用、调试等场景下变得不再繁琐。截止2018年9月华为云已经提供了45种人工智能服务、涵盖142种功能，再加上AI开发平台ModelArts、AI应用开发平台HiLens、量子计算模拟器与编程框架HiQ，以及与线上体验一致的离线开发套件Atlas200等，形成了端到端工程化落地AI的普惠能力。

诚然，每一次工业革命都是技术转化为生产力的过程，也是先进技术不断扩展到普通人的过程，智能时代也不例外。随着AI的发展，所有的行业都将触及人工智能技术，华为云“普惠AI”的落地无疑将缩短这一进程。至少，2018年的华为云让我们看到，AI可以是街头巷尾的。（文/宁川）

三联虹普证监会都通过定增了为什么还要打压股价

300384股价下行有多方面原因

大盘弱势，特别中小创板块近期走势奇差。个股难以幸免

高管减持

公司经营业绩不好，同比下降明显。估值过高

做MTT时用的三联液配方是SDS10g，异丁醇5ml，10M HCl 0.1ml，没有异丁醇的话，用异丙醇行吗？急！！！

应该明确实验前

1。选择适当浓度的细胞接种。的内贴壁细胞的96孔培养板中，在正常情况下，包括约105个细胞。但由于该地区有很大的不同，在不同的细胞附着在MTT法，预实验检测其贴壁率，倍增时间以及种子细胞的生长曲线的条件下，确定测试孔接种细胞数和温育时间，为了确保列车终止诱导的细胞过满。因此，在为了保证MTT晶体形成的细胞数成比例呈线性关系。否则，细胞的数目的敏感性降低太多，太少没有观察到差异。

2。集合中的药物浓度。请务必看到更多的文献，参考其他人的结果，然后给出一个比较大的范围内的第一次筛选。根据自己的筛选狭窄的浓度和时间范围再细筛的结果。记住！否则，可能会使用的时间和浓度的药物的有效浓度和时间。

3。设置的时间点。 OD值吗？在不同的时间点，输入Excel工作表中，并最终在不同时间点的抑制率变化的测量，绘制图形的变化，当曲线变得平坦（高原）的时间点，应使用最好时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制最明显的表现）。

4。孵化时间。 200UL 10 4-5电源增殖细胞的培养液中是难以维持68H，营养不足，细胞增殖阶段逐渐趋向G0期往往仍影响的结果，我们在48小时介质中被改变了。

5.MTT法只能测定相对细胞数和相对活力，不能绝对数量测定细胞。做MTT，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值增加。

6。理论未必全是。要根据自己的实际情况进行调整。

实验对照孔加药孔孔应设置为零。零孔加培养基，MTT，二甲亚砜。控制井和计量孔必须加细胞培养基中，MTT法，二甲亚砜，和不同的是添??加到媒体控制井，而溶解该药物中加入不同浓度的药物的给药组。

8。避免血清干涉。含15％FBS培养基中培养的细胞中时，高血清物质会影响试验井的光吸收值。将测试的灵敏度测试增加背景。因此，它通常是优选的是小于10％胎牛血清的培养液中。着色后，尽量吸净培养孔残余的培养基。

实验步骤

贴壁细胞：

1。上收集的细胞数，调整浓度的细胞悬浮液加入到每个孔100ul铺板所测试的细胞调节至密度为1000-10000孔（边缘？孔填充用无菌PBS中）。

2.5％CO2，37℃孵育，直到细胞单层覆盖的底部的孔（96 - 孔平底板），添加药物的浓度梯度，在原则上，细胞的粘附给药或两小时或半天的时间，但我们常在前一天下午铺板第二天早上剂量。一般为5-7梯度，每孔品100μl，位于3-5井。建议设5，否则难以体现

3.5％的CO2，并在37°C孵育16-48小时，倒置显微镜下观察到的真实情况。

4。添加到每个的阱20ulMTT溶液（5mg/mL的，或0.5％的MTT），并培养4小时。用MTT反应的药物可以先离心丢弃培养基，用PBS仔细洗涤2-3次，然后添加到培养基中含有的MTT。

5。终止的文化，并认真吸收孔培养基。

6每孔加入150ul二甲亚砜，设置振动筛在低速振荡10分钟的晶体完全溶解。在OD490nm的酶联免疫吸附检测器测量的每个孔的吸光值。

7。同时置零孔（培养基，MTT，二甲亚砜），对照孔（细胞，相同浓度的药物溶出介质，培养基，MTT法，二甲亚砜）

悬浮细胞：

1）收集对数生长期细胞，调节细胞悬液浓度为1×106互补序列①1640（无血清）介质40ul;②加放线菌素D（有毒）10UL稀释培养基升的？克/毫升，需要预先测试，以找到最佳稀释,1:10-1：20）;③需要检测对象10UL;④细胞悬浮液50μl（即，5×104cell /孔）的100ul加入96 - 孔板（边缘？孔填充用无菌水）。建立控制每块板（加100（原液100 1640）。

2）在37℃，5％CO2孵育16-48小时，并在倒置显微镜下观察。

3）每孔加入10微升MTT溶液（5毫克/毫升，或0.5％的MTT），并培养4 h。（悬浮细胞推荐WST-1，培养4小时后可以直接跳到步骤4），直接酶联免疫吸附测定的OD570nm 630nm的校准测量每孔的吸光度值）

4）离心（ 1000转x10min）仔细吸掉上清液，每孔加入100微升二甲亚砜中，设置摇动器在低速振荡10分钟，完全溶解的结晶。在酶联免疫吸附测定OD570nm（630nm的校准）测量的吸光度值？为每个孔。

5）设置零孔（培养基，MTT，二甲基亚砜）对照孔（细胞，相同浓度的药物溶出介质中，在培养基中，MTT法，二甲亚砜），每个设置的3个井。

MTT准备

MTT通常情况下，最好使用4℃避光过滤器后两周内，或配制成20,10,5保存在 - 20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量包装，用黑袋或黑纸，铝箔及包装暗，避免分解。我一般都把MTT粉包装EP管，现有的服务直接添加到培养板，不需要一下子有这么多的，特别是当它绝对MTT变为灰绿色不能重复使用。

MTT致癌性，使用时要小心的那种透明薄膜手套的最佳条件。被称为MTT需要无菌，MTT细菌，是非常敏感的;到96孔板一个PBS 黑暗中额外的时间并不重要，毕竟，时间是短暂的，你不用担心时，你可以把关了灯手术台。

制备MTT;溶解，还配备用盐水在60℃水浴中进行增溶。

PBS配方：

氯化钠8克

KCL0.2克

磷酸氢二钠1.44克

KH2PO40.24克

调pH值7.4

给定容量1L

细胞接种（平台）

细胞30代不要使用，因为状态并不好，培养板中使用一个很好的（最好是进口板），坏板或重复使用的板仅做预实验。

最佳接种密度计算出来的按照预实验接种后，细胞生长抑制率（或增值率），因为关于OD值吗？细胞密度10000/ml的测量时间间隔呈直线关系最好的，最可靠的结果。如果店铺是太稀细胞的杀伤不会很明显，可能都过于密集的细胞凋亡，细胞生长速度过快的营养是不够的，最后导致死亡。过密或过少的细胞，细胞增殖将是过快或过慢，差线性关系，其增值率。因此，MTT细胞的密度使用更10000/ml的，100ul /孔。

细胞密度的特点，不同的细胞，如果细胞刺激作用的药物，那么细胞浓度为小点，如果你这样做对细胞有抑制作用的药物，然后取更大一点细胞浓度，因此，与对照的差异，该数据是更好。悬浮细胞的各孔中的细胞数达到105，贴壁细胞103-104。

其他的声音：

第一个单元格播种密度不能太一般每孔1000就足够了，我想，宁少勿多。特别是对肿瘤细胞。 10000 /孔是太高，所以，即使药物，MTT法不能表达的最佳点板浓度在4000-5000 /孔，太少的SD值。

2.MTT本身是一个相当厚的实验约10％，增殖率的波动也就不足为奇了。特别是新手，有20％的波动也是常见的，因此它可能是由于技术原因，特别是种板技术必须过关的。

我MTT法检测肿瘤细胞，这些细胞长一开始我100000/ML浓度的疫苗接种，结果细胞长的太满，结果梯度也没有线性关系。调整后的浓度使用了40000?80000/ML浓度MTT法，做的好点的是60000?70000/ML组的浓度。 40000 / M的基团的浓度，是因为这些细胞是以下，药物作用或只是没有一个有良好的线性关系的梯度，根据细胞生长速度，以及药物的特性（的时间依赖关系，并的浓度依赖性的药物），以确定培养的时间是48小时或72小时。

一定要注意避免细胞的细胞悬液混合沉淀下来，在每个孔中的细胞数的范围，收到了一些必要再混合均匀。移液管操作要熟练，避免人为错误。虽然更准确比移液管移液管，但如果操作不熟悉，CV将在8％左右。此外，吹了太多的时间，也影响细胞活力。因此，熟练的鞋，尽快在黑板上。

让我谈谈我的一点经验：

1。狗新花样不能太多悬挂的总的3-4倍，吸液管液量可能会比较容易混合。 10毫升优选地安装的悬浮液中3?4毫升：该悬浮液的离心管太少容易吹气泡，悬浮液的特定也是不容易被风吹到单细胞悬浮液。。。

移液管移液管最好在1毫升左右：吸入过量的液体，看起来液管余下的数，如吹打容易起泡吸管吸了很多量过小，强度移液是不够的，将移液不均匀。如果吸液量1毫升稻草，总液量，在约5ml的好处

吸气时，悬挂在底部，然后抬起，但吹了下来，不留液体的表面，否则容易一拳砸的气泡。

4。狗新花样，你可以数100吹打均匀（前约30-50倍的吹打加细胞基本上差不多均匀。加细胞分别接种2孔反复移液管移液3次3次后，他们把他们的枪挂在5秒内的细胞悬液，然后划出一定的速度悬浮液）。

用吸头，每孔加入到细胞中不要太猛了，否则你会发现细胞在想要添加的移液管尖中的孔的底部的势头由于收集了一堆，一般在这种不均匀的分散液接触抑制周围的孔的底部的中心，影响细胞的生长。因此，速度不能太快，也不能太慢。我习惯了增加每块板水平握手后，左一个右其次，移动的答复中，细胞可以均匀地分散这些。（铺板技术是MTT法的关键，也是基础，我们必须练好，一旦学生振荡器和混合与旋涡细胞，最后一个单元格都死了，使用这种方法是不建议混合细胞

BR /加入MTT

个人认为MTT最关键的是你的手机号码和MTT适当的比例补充说，真正起作用的，和具体的细胞数量之间的关系和真正的工作真的不好确定，我认为MTT支付超过最低量好一些

MTT各种报告的MTT，一般是过度10UL不够的，如果你不使用96孔板， MTT按照10％的比例超过100ul培养基地。，加入MTT振荡让MTT和媒介组合，但这个应该不大。

有个别的孔，如立即加入MTT变蓝黑色，污染的可能性是很大的，另一个在前面的MTT摊薄细胞仍然需要适当的方法来过滤消毒。可以加MTT前显微镜下才能看到，如果有一个孔染菌，染菌孔附近往往是 /

血清白蛋白对大多数的药物的组合的效果，它是可能的分开的药物和MTT一起看到的将反应MTT法不能反应，不必除去水培的含有药物的溶液，直接加。

上层清液

争：

1加DMSO液体吸掉，但培养液，紫色晶体吸收之前，该第一的平板离心机，2000转，5分钟，然后吸掉上清液（如果是悬浮细胞，此方法建议在2500rpm 10分钟离心分离的悬浮细胞，并做MTT的最好的圆底96孔板中的96 - 孔板，注意不要结晶颗粒吸掉上层清液后，建议每孔吸出150-160ul）

2。每次我都会MTT和孵育4小时，然后离心1000G 5分钟枪小心吸去上清液，或将一小部分蓝水晶吸出，所以还是建议翻转颠倒了！

另外，我们可以直接在板翻转颠倒（垫层滤纸）2-3倍的方式“吸”是不容易使细胞脱离出来。轻拍，或倾斜一点帮助吸液管，紫色晶体几乎没有可见的列，但你自己的细胞贴壁的前提下，比较监狱，半贴壁生长的细胞容易脱落。药物作用时间长，阴性对照组的细胞可能是由于过多离开MTT加入后形成的结晶漂起来，所以不能直接排放

MTT，这一步必须小心，不要使用贴在墙上倒立的方式，因为是不强大的单元格将被倒掉，从而影响OD值吗？悬浮细胞，不拍打上清液。，离心后，不拍打这种方法杀了人。

5。加入MTT反应完成后3-4h后，在96孔板的作用是从孵化器中删除要轻柔，避免振荡结晶，它溜了。您可以尝试在96孔板倾斜30度角，然后的枪口慢慢吸一些细胞排球吸，有些人会用移液器吸头吸病人，枪口下的强度和方向，以确保每个孔是不要让吸头接触到孔??底，一次后倾斜孔板，不反复倾斜的平直，这样也会使晶体脱落。

6。移液与医用注射器登上教训针对角线的经验教训沿着培养基MTT的墙壁，好像我1毫升针小心地吸可靠的比其他的方法，一般不吸紫色晶体。

避免上层清液和改进的方法

一般容易发现，即使贴壁细胞在96孔板离心式离心机，的MTT溶解在DMSO，结果是没有好，不能得到预期的结果重复性差。

解决方法1：以下文献方法：周建军等，评价抗癌物质活性的改良MTT法，中国期刊的药品，1993,24（10）:455-457 BR /

具体方法如下：

三溶解液：10％SDS，溶于蒸馏水中，5％异0.012mol/LHCL的。

三联溶解解决方案：SDS10g，异丁醇5毫升的10M盐酸0.1毫升双蒸水溶解配成100mL溶液

操作：细胞悬浮在培养板中，加一定密度的解决方案，90ul /孔;管理，然后（悬浮细胞）在同一时间或4h后（贴壁细胞）通过加入不同浓度的药物10UL /空穴，位于三井。另外，每块板另一个没有零孔（仅添加到培养基中，无细胞和药物）培养2d后加入MTT溶液20ul /孔，和文化继续4小时，然后加入上述的三重液体品100μl/孔，在37℃静置过夜，用酶测定的标准仪器孔A570值？

优点：简化操作，提高了可靠性。

解决方法2：日本同事有一个新的试剂CCK-8试剂，CCK -8试剂可用于简单和准确的细胞的增殖和毒性分析其基本原理是：含有的试剂WST-8 [化学名称：2 - （2 - 甲氧基 - 4 - 硝基苯基） - 3 - （4 - 硝基苯基）-5 - （2,4 - 二磺酸苯基）-2H-四唑单钠盐]，这在电子载体1 - 甲氧基-5 - 甲基硫酸盐吩嗪二甲基（1 - 甲氧基PMS）线粒体脱氢酶的作用降低的高度水溶性的黄色染料（甲臜染料）A的产生与活细胞的数目的数目成正比，所以此功能可以用于直接的细胞增殖和毒性分析CCK-8试剂已预先装入的细胞增殖和毒性分析所需的组件，未经稀释，然后缓冲区或中等，没有任何放射性同位素和有机溶剂的CCK-8试剂。因此，没有特别的技能，你可以让每一个用户准确，可重复的实验结果。

★优势 / a

1，简单的一个步骤的结果

2，节省时间，不需要预制开放

3，安全没有必要放射性同位素，有机溶剂

4，迅速消除溶解除沉操作

5，高灵敏度，灵敏度比MTT

6，重复性几个不错的步骤，无损，准确

是比较昂贵的，如果充分的资金，这是件好事。

★细胞增殖实验使用：

1，接种细胞悬液100μL96孔板，预先放置在37℃，在5％CO 2培养箱培养。

2在每个孔中引入CCK-8试剂10μl的。

培养板在孵化器1-4个小时。

4，测定吸光度在450nm波长为600nm或600nm的波长参考。

解决方法3：使用MTS / a

解决方案4：

加入DMSO

放弃孔内液体，最好不要更换相同数量的实验DMSO加入DMSO清洁，直接加入到DMSO首先，除去上清液，沉淀将难溶于培养基颜色检测测量时，将影响最终的结果，但前提是不能使细胞与吸掉，因为错误是远大于培养基中没有放弃一个干净的错误，所以，以确保细胞的前提下，尽可能不虹??吸的培养液虹吸如果培养溶液不是一次性清洁空白孔应留下的培养液相同量的，所以检测时的培养液的影响，可以除去尽可能多的DMSO的量为100ul或150ul

1。添加的DMSO后使用振荡器轻轻振摇5 - 10分钟时间控制密切越好，放置时间长了会影响结果，该值将过大，其结果是不可靠的。

2。后加入DMSO排球反复抽吸溶，尽快解散后检测。实验孔是小的，它建议，这种方法，因为其更好的效果比振荡溶解。

3，或者在37度把培养箱中培养15分钟，溶解结晶

振荡，让甲溶解，以便更好地测量的吸光度振荡96孔板具体地说，振荡器，目的：凿孔泡沫。气泡的存在下，由于其光的反射和折射效果（原则读者是通过特定波长的测量样品中的特定物质样品的吸光度推测）的浓度，会导致结果抵消了测定OD值吗？

至于测定给出的波长是不同的颜色溶液，DMSO，溶解紫（红）色，490nm处的最大吸收值，而在ATCC的MTT试剂盒使用的是不DMSO，它的测定波长为570（在ELISA实验，OPD为底物测得的波长为492，选择的TMB底物溶液是450）; SDS和酸化异丙醇选择570nm的，并建议作为参照波长等于655nm。

DMSO溶解经过10分钟内测，越放颜色越深，SDS溶解液测定吸光值，其值在三天内保持不变。

细胞密度太大测定吸光度细胞密度过大，吸光率也小;另一个细胞状态的关系，细胞状态不好的吸光度值低;少量的细胞，或短的时间内培养的OD值会比较低。每个洞之间的差异尤为明显说明可能存在的污染，空白孔的OD值过高，很可能是细菌的污染。

井直接OD值差别一般应在0.1-0.15不同的考虑：1。种子细胞不统一或疫苗接种时，应保证每一个孔一般为1000-10000元以及细胞细胞计数，加入细胞悬液培养基中定容，轻轻吹打几次，使细胞均匀分布的，因此，这是更好的不是直接加入预定体积的细胞悬浮液，接种疫苗应加入含有血清的介质2。粘附时间:18-24小时，如果没有，而不是悬浮细胞可虹吸

/一般，为了实验的精度，和各浓度可提供5-6井可以最终的统计，可以除去的最大值和最小值，或荒谬的值？其特征在于，所述数据被除去，这些离谱数字细胞污染，是否在培养过程中细胞的死亡，文化，蒸发过度的附加组件的MTT溶液是不准确的，在5％二氧化碳培养箱中培养，在37°C，无论是时间常数（1-4小时）有密切的关系，当然的OD值的测定仪器状态是正常的，是非常重要的！（一般热身20分钟）。

MTT吸光度误差在0.2至0.8之间。分析化学相关的兰伯特Beer定律，朗伯 - 比尔定律骨密度分析偏差，通常在标准曲线的情况下是不是线性的，尤其是吸光物质的浓度较高时，可以清楚地看出通过原点到浓度轴弯曲的现象（吸光度轴弯曲）情况称为朗伯 - 比尔定律的偏离定量的曲线的弯曲部，将产生较大的误差。骨密度分析仪测量不准确的误差的主要来源。光度计具有一定程度的测量误差。这些错误可以是来自于光源不稳定，变化的实验条件下偶然不准确的读数。

光度计透射的标尺刻度是均匀的。吸光度标尺刻度不均匀。波动对传动比一定值时，读出的相同的工具;吸光度读数波动不再是一个固定的值。吸收更大的错误读数波动而引起的透光率或大或小，浓度测量误差大，更大的吸光度，最好的光度当选的吸光度读数不下降在中间规模的要被测量的透射率T在15％至65％的范围内的溶液，或在两端时的吸光度，A是在0.2?0.8之间，为了确保较小的相对误差的甲= 0.434（或透射比T = 36.8％），最小相对误差的测量。

其他的声音：

最好的570nm波长过滤器，MTT吸光度测量。在此波长的峰值，在其他词语具有大致490nm处与其他波长的高灵敏度，但我的经验的灵敏度降低了一半。

2 BIO-TEK，我们使用ELx800，一般值2是可靠的，如果该值是要考虑它是否是一个错误在实验过程中，我已经看到了花园的一些职位OD值可能与活细胞数在0.2-1.2范围内具有良好的线性关系，复孔太大的区别，但OD值在0.3-0.9范围内的好，如果你的OD值？此范围之外的，做实验，细胞计数可能不适合，你应该调整细胞的数量。边缘效应

孔一般只有空白，非培养细胞，或这四条线中的数据将是高或低的由圆圈包围的96孔板，96孔板的培养箱中因为缺乏湿度，和孵化器具有一定的温度，由于温度梯度，使得边缘的孔蒸发更快，导致的各个组成部分中的培养基中的浓度增加，导致这种现象的不同的细胞状态，它是必要的，以保证湿度的培养箱中，并以降低的频率和持续时间的开关培养箱。方法：所有周围的圆形孔的孔板，“否”，的影响是非常大的，最外面的圆必须添加水，PBS或培养液中，只要你能防止水分蒸发。

如何计算的IC50后的寇方法：

（1）lgIC50 = XM-I（P- （3-PM-PN）/ 4）

XM：LG的最大剂量

I：LG（最大剂量/相邻剂量）

P ：正反应速率和

PM：最大的阳性率

PN：最小阳性率

例如：各组浓度0.1,0.01， 0.001,0.0001,0.00001,0.000001，稀释10倍，与最大浓度为0.1的抑制率分别为0.95，0.80，0.65,0.43,0.21,0.06到

计算公式：

PM =在

Pn的0.95

= 0.06